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精子核蛋白染色液(伊红-苯胺蓝法)的作用原理是酸性条件下，苯胺蓝能特异地与精子核组蛋白富含的赖氨酸残基结合生成紫蓝色化合物，根据着色的深浅来判断精子的成熟程度。

• 蒸馏水、新鲜精液样本、梯度乙醇、二甲苯或环保脱蜡透明液、中性树胶
  
• EP管、吸管或移液器、离心机、恒温箱、防脱载玻片

• 蒸馏水冲洗载玻片时要注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子。
  
• 滴加染液时应完全覆盖涂片区域，并用吸管吹匀。
  
• 甩去多余水分应防止涂片干燥。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 配制洗涤工作液：取适量的10×浓缩洗涤液，以蒸馏水10稀释后即为洗涤工作液。
  
• 配制洗脱工作液：取适量的10×浓缩洗脱液，以蒸馏水10稀释后即为洗脱工作液。
  
• 取上述液化精液0.2～0.5mL置于EP管，再加入1～1.5mL洗涤工作液，用吸管或移液器反复吹打数次，室温2000rpm离心5min，弃去上清液，保留管底精子沉淀团，重复该操作3次。
  
• 向第3步的EP管中加入洗涤工作液约0.1～0.2mL，制成混合精子悬液。
  
• 取上述已制备好的精子悬液15μL，均匀涂布于防脱载玻片上，自然干燥。
  
• 在涂有待测精子的涂片区内滴加固定液2～3滴，室温固定5～15min，蒸馏水冲洗5～10min，并甩去多余水分。
  
• 在涂片区内滴加苯胺蓝染色液2～4滴，室温染色5min，蒸馏水冲洗5min，并甩去多余水份。
  
• 将载玻片竖直插入已盛有洗脱工作液的反应池中，使待测标本涂片区完全浸没于洗脱工作液中，室温处理2～5min。
  
• 蒸馏水冲洗1～5min，并甩去多余水分。
  
• 在涂片区内滴加复染液2～4滴，室温染色2～5min，蒸馏水冲洗1～5min。
  
• 迅速吹干玻片，镜检，如果需要长久保存样本，可将玻片依次置于70%、80%、95%和100%乙醇中各2min，二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封片。